杏耀几年

摘 要：目的  研究腺梗豨莶Siegesbeckia pubescens地上干燥部分的化学成分。方法  采用萃取法、硅胶色谱、凝胶及反相ODS柱色谱等方法进行分离和纯化，并综合运用IR、HR-ESI-MS、¹H-NMR、¹³C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC等方法鉴定化合物的结构。结果  从腺梗豨莶乙醇提取物正丁醇萃取部分分离得到6个化合物：1个单萜苷（1）、4个二萜苷（2～5）以及1个二酮哌嗪类化合物（6），分别鉴定为 (2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷（1）、腺梗豨莶丁苷（2）、对映-2β,15,16,19-四羟基海松烷-8(14)-烯-19-O-β-吡喃葡萄糖苷（3）、对映-2-酮基-15,16-二羟基海松烷-8(14)-烯-19-羧酸-β-吡喃葡萄糖苷（4）、豨莶新苷（5）、刺参萜酮B（6）。结论 化合物1为新化合物，命名为豨莶苷F，化合物6为首次从该属植物中分离得到。

豨莶为菊科（Asteraceae）豨莶属SiegesbeckiaL. 一年生草本植物，别名风湿草，肥猪草、黄花草、珠草等，为常用中药，始载于唐代《新修本草》^[1]。《中国药典》2015年版收载菊科植物豨莶Siegesbeckia orientalis L.、腺梗豨莶S. pubescens Makino 和毛梗豨莶S. glabrescent Makino 3种植物的干燥地上部位作为中药豨莶入药^[1-2]。豨莶草具有祛风湿、利筋骨、清热解毒、降血压之功效，主要用于治疗风湿痹痛、筋骨疼痛、腰膝无力、半身不遂、痈肿疮毒、疔疮肿毒等症。现代药理实验表明豨莶草提取物具有抗炎^[3-8]、抗过敏^[9]、抗血栓^[10]、抗组胺释放的活性^[11]以及其他活性^[12-13]。同时，也确认了豨莶草中的二萜类成分是其发挥抗风湿作用的物质基础^[14-15]。基于豨莶草广泛的药理活性和临床应用，国内外研究者对豨莶草的化学成分也进行了大量研究，170多个化合物从地上部分分离鉴定出来，主要包括对映-海松烷型二萜（ent-pimarane）、对映-贝壳杉烷型二萜（ent-kaurane）、倍半萜、黄酮、三萜、有机酸等^[16-20]。到目前为止，对豨莶草研究的主要是醋酸乙酯萃取部位，对水层的研究较少，对本实验在前期的研究基础上，对豨莶草乙醇提取物的水层的正丁醇萃取部分进行了化学成分研究，从中得到6个化合物（图1），分别鉴定为 (2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷（(2Z,5E)-7-hydroxy-3,7-dimethyl-2,5-octadiene-1-O-[α-L-rhamnpyranosyl (1→6)]-β-D-glucopyranoside，1）、腺梗豨莶丁苷（pubeside D，2）、对映-2β,15,16,19-四羟基海松烷- 8(14)-烯-19-O-β-吡喃葡萄糖苷[ent-15,16,19- trihydroxypimar-8(14)-en-2-one-19-O-β-glucopyrano- side，3]、对映-2-酮基-15,16-二羟基海松烷-8(14)-烯-19-羧酸-β-吡喃葡萄糖苷 [ent-15,16- dihydroxypimar-8(14)-en-2-one-19-oic-β-glucopyrano-side，4]、豨莶新苷（neodarutoside，5）、刺参萜酮 B（eleutherazineB，6）。其中化合物1为新化合物，命名为豨莶苷F，化合物6是首次从该属植物中分离得到。

1  仪器与材料

Bruker-400/AvanceDRX-400核磁共振光谱仪（德国Bruker公司），Agilent Tchjnologies Cary 60UV-Vis紫外分光光度计（美国Agilent公司），Nicolet Nexus 470红外光谱仪（美国Thermo公司），Xevo G2 Q-TOF高分辨质谱仪、Waters SQD质谱仪（美国Waters公司）；KQ5200B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），PL341/343旋光仪（美国Perkin-Elmer公司）；BP1224S万分之一电子秤（北京赛多利斯天平有限公司），DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）；LabAlliance分析型高效液相（天津兰博实验仪器设备有限公司）；Waters2487半制备型高效液相（美国Waters公司）；制备型高效液相（北京创新通恒科技有限公司）；Rotavapor R-210旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；BSZ-100自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

甲醇、乙腈、醋酸乙酯、氯仿、石油醚、丙酮、正丁醇（北京化工厂分析纯产品）；柱色谱用硅胶（200～300目，安徽良臣硅源材料有限公司）；薄层色谱硅胶板GF₂₅₄、薄层色谱硅胶H（青岛海洋化工厂）；反相硅胶（YMC*GEL ODS-A，YMC Co.，Ltd.，日本）；半制备型色谱柱（YMC-pack C₁₈柱，250 mm×10 mm，10 mm，YMC Co.，Ltd.，日本）。

腺梗豨莶于2011年9月采购自河北安国药材市场，由北京大学医学部付宏征教授鉴定为腺梗豨莶Siegesbeekia pubescens Makino。植物样品（2011009）保存在北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室。

2  提取与分离

豨莶草地上干燥部分（50 kg），分成5批次，每批次10 kg，75%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压干燥得到浸膏。浸膏用水分散，依次用醋酸乙酯和正丁醇萃取。得到醋酸乙酯部位（350 g）和正丁醇部位（85 g）。

取正丁醇部位8.2 g，经硅胶柱色谱分离，氯仿-水系统洗脱（30∶5∶1→20∶5∶1→10∶5∶1→5∶1∶1），共得到45个组分（Fr. 1～45），经TLC检测，合并Fr. 1～8得到部位A（2.3 g），合并Fr. 9～21得到部位B（1.4 g），合并Fr. 22～35得到部位C（1.8 g），合并36～49得到部位D（1.2 g）。部位B（1.4 g）经过MCI柱色谱分析，甲醇水系统洗脱，TCL检测合并，得到4个组分B-1～B-4，B-1经Sephadex LH-20分离（甲醇-水，30%），制备HPLC纯化（甲醇-水，45%）得到化合物1（12.1 mg）和6（25.3 mg）。B-2经制备HPLC分离纯化（乙腈-水，17%）得到化合物2（16.4 mg）和4（23.3 mg）。B-3经制备HPLC分离纯化（乙腈-水，22%）得到化合物3（19.2 mg）和5（11.5 mg）。

3  结构鉴定

化合物1：类白色粉末，易溶于甲醇，1%茴香醛/硫酸显红色，[α]25D −88° (c 0.1, MeOH)；UV (MeCN) λ_max(nm): 200；红外光谱在3 351, 2 919,   1 660,1 549, 1 448, 1 376, 1 305, 1 263, 1 134和    1 039 cm⁻¹处有吸收，提示结构中存在羟基和双键。

HR-ESI-MS给出准分子离子峰477.233 8 [M－H]⁻（计算值477.2336，C₂₂H₃₇O₁₁），结合其¹³C-NMR数据和DEPT谱，确定该化合物的分子式为C₂₂H₃₈O₁₁，不饱和度为4。¹H-NMR谱中显示了4个甲基信号δ_H 1.61(3H, s), 1.57 (3H, d, J = 5.8 Hz), 1.42 (3H, s) 和1.42 (3H, s)；3个双键氢信号δ_H 5.86 (d, J = 15.6 Hz) 和δ_H 5.80(m)；2个端基氢信号: δ_H 4.81 (d, J= 7.6 Hz) 和δ_H 5.45(s)；12个连氧碳上的氢信号：其中2个是苷元上的，10个为糖上的；分析¹³C-NMR及DEPT可知，该化合物结构中存在22个碳原子：4个甲基、3个亚甲基（包括2个连氧碳信号δ_C 68.3,64.8）、13个次甲基（包括3个双键碳信号δ_C 141.1,123.3, 122.3和9个糖基碳信号）；1个季碳（双键碳信号δ_C 139.3）；以及1个三取代的连氧碳（δ_C 69.6）。以上数据跟文献报道的化合物jasnervoside E^[21]和rhodioloside D^[22]比较接近，推测该化合物也是含有2个糖的单萜苷（1个葡萄糖、1个鼠李糖）。δ_H 4.81 (d, J = 7.6 Hz) 的端基氢信号，提示了葡萄糖为β-葡萄糖。端基氢δ_H 4.81 (d, J = 7.6 Hz) 和甲基δ_H1.57 (d, J = 5.8 Hz) 信号，结合糖在自然界中的分布规律，提示了结构中含有1个α-鼠李糖。

分析1D NMR以及HSQC谱，将与碳原子直接相连的氢信号进行归属。比较化合物1和rhodioloside D ^[22]的核磁信息，两者的差别主要是化合物1结构中新增了Δ⁵⁽⁶⁾双键和葡萄糖上连着的鼠李糖。这种差别通过2D核磁信息进行了确认。在HMBC谱中（图2），δ_H 1.61 (s, 10-Me) 与δ_C 139.3(C-3), 123.3 (C-2), 64.8 (C-1), 52.2 (C-4) 有远程相关，结合COSY谱中H-1a/H-1b/H-2的自旋系统，提示结构中存在片段A（虚框内部分）。另外，在HMBC谱中，δ_H 1.61(s, 8-Me) 与C-6、C-7和C-9有相关，结合COSY谱中H-4a/H-4b/H-5之间的相关，提示结构中存在片段B（标灰部分）。片段A和片段B共用C-4，确定了该化合物的苷元部分。在HMBC谱中，端基氢δ_H 4.81与δ_C 64.8相关，提示葡萄糖连接在C-1位置上；根据葡萄糖单元C-6′的化学位移明显向低场位移（由δ_C 63左右移向δ_C 68.2）结合δ_H 5.45与δ_C 68.2有相关，提示鼠李糖连接在C-6′上。

通过与rhodiolosideD^[22]核磁信息比对，化合物1的C-10的化学位移在δ_C 23.3与Δ²⁽³⁾为E构型rhodiolosideD的C-10（δ_C11.9）的化学位移差距较大，与另一个结构类似的Δ²⁽³⁾为Z构型的sacranosideB^[23]的C-10化学位移接近（δ_C 23.7），确定了Δ²⁽³⁾为Z构型。δ_H 5.86 (dd, J = 16.0, 12.8Hz) 烯烃质子信号，确定了Δ⁵⁽⁶⁾为E构型。将化合物1完全水解，经TCL检测并与标准糖对比，验证了D-葡萄糖和L-鼠李糖。故化合物1的结构确定为 (2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷，为1个新化合物，命名为豨莶苷F。具体核磁数据见表1。

化合物2：白色粉末（甲醇），易溶于甲醇，1%茴香醛-硫酸显红色。ESI-MS m/z: 499.2 [M－H]⁻，故推出化合物相对分子质量为498，分子式C₂₆H₄₂O₉。¹H-NMR (400 MHz, Pyridine-d₅)谱的高场区有3个甲基单峰信号δ_H0.65 (3H, s, 20-Me), 1.10 (3H, s, 18-Me) 和1.08 (3H, s, 17-Me)；低场区显示1个双键氢信号δ_H 5.37 (1H, s) 提示存在三取代的双键。1个端基氢信号δ_H 4.62 (1H, d, J = 7.6 Hz)，以及10个连氧碳上的氢信号，提示该化合物是1个二萜苷。¹³C-NMR (100 MHz, Pyridine-d₅)给出26个碳原子信号δ_C 53.5(C-1), 212.2 (C-2), 50.6 (C-3), 43.5 (C-4), 54.5 (C-5), 22.6 (C-6), 35.9 (C-7),136.9 (C-8), 50.4 (C-9), 43.4 (C-10), 18.7 (C-11), 32.3 (C-12), 37.8 (C-13), 120.2(C-14), 76.5 (C-15), 63.7 (C-16), 23.0 (C-17), 27.9 (C-18), 73.5 (C-19), 15.7 (C-20),105.2 (C-1′), 75.0 (C-2′), 78.2 (C-3′), 71.5 (C-4′), 78.0 (C-5′), 62.7 (C-6′)。¹H-NMR和¹³C-NMR谱也显示了对映海松烷型二萜的特征信号。该化合物C-19向低场位移明显，推测糖基链接在C-19位，故将该化合物的波谱数据与豨莶丁苷的波谱数据对照，两者的波谱数据基本一致^[24]，故鉴定该化合物为腺梗豨莶丁苷。

化合物3：白色粉末（甲醇），易溶于甲醇，1%茴香醛/硫酸显红色。ESI-MS m/z: 499.43 [M－H]⁻，相对分子质量为500，分子式C₂₆H₄₄O₉。¹H-NMR (400 MHz, Pyridine-d₅)谱的高场区有3个甲基单峰信号δ_H 0.83(3H, s, 20-Me), 0.84 (3H, s, 17-Me) 和1.10 (3H, s, 18-Me)；低场区显示1个双键氢信号δ_H 5.18 (1H, s) 提示存在三取代的双键，1个端基氢信号δ_H 4.20 (1H, d, J = 7.6 Hz) 以及12个连氧碳上的氢信号，提示该化合物是1个二萜苷。¹³C-NMR (100 MHz, Pyridine-d₅)给出26个碳原子信号δ_C 48.9(C-1), 63.8 (C-2), 45.9 (C-3), 40.2 (C-4), 55.5 (C-5), 22.4 (C-6), 36.6 (C-7), 137.9(C-8), 51.2 (C-9), 39.7 (C-10), 19.0 (C-11), 32.8 (C-12), 37.9 (C-13), 129.9 (C-14),76.6 (C-15), 63.9 (C-16), 23.2 (C-17), 28.2 (C-18), 73.6 (C-19), 17.1 (C-20), 105.6(C-1′), 75.3 (C-2′), 78.6 (C-3′), 71.7 (C-4′), 78.5 (C-5′), 62.7 (C-6′)。¹H-NMR和¹³C-NMR谱也都显示了对映海松烷型二萜的特征信号。故将该化合物的波谱数据与豨莶文献中报道的系列二萜波谱数据对照，该化合物的波谱数据与文献中报道基本一致^[25]，故鉴定化合物3为对映-2β,15,16,19-四羟基海松烷-8(14)-烯-19-O-β-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末（甲醇），易溶于甲醇，1%茴香醛-硫酸显红色。ESI-MS m/z: 511.2 [M－H]⁻，相对分子质量为512，分子式C₂₆H₄₀O₁₀。¹H-NMR (400 MHz, Pyridine-d₅)谱的高场区有3个甲基单峰信号δ_H 0.91(3H, s, 20-Me), 1.10 (3H, s, 17-Me) 和1.35 (3H, s, 18-Me)；低场区显示1个双键氢信号δ_H 5.40 (1H, s) 提示存在三取代的双键，1个端基氢信号δ_H 6.10 (1H, d, J = 7.8 Hz) 以及9个连氧碳上的氢信号，提示该化合物是1个二萜苷。¹³C-NMR (100 MHz, Pyridine-d₅)给出26个碳原子信号：δ_C 53.7(C-1), 207.3 (C-2), 51.3 (C-3), 48.6 (C-4), 54.7 (C-5), 23.9 (C-6), 36.2 (C-7),140.0 (C-8), 50.1 (C-9), 43.1 (C-10), 18.6 (C-11), 32.4 (C-12), 37.9 (C-13), 130.2(C-14), 76.5 (C-15), 63.7 (C-16), 23.1 (C-17), 27.6 (C-18), 175.7 (C-19), 14.5(C-20), 96.2 (C-1′), 73.6 (C-2′), 79.3 (C-3′), 70.7 (C-4′), 78.7 (C-5′), 61.9 (C-6′)。¹H-NMR和¹³C-NMR谱也都显示了的对映海松烷型二萜的特征信号。与豨莶酸相比，该结构中多了1个羰基信号及1个糖基，少了1个2位上连氧的次甲基，故将推测该化合物为C-2位被氧化成羰基的豨莶酸苷，在HMBC谱中，端基氢与δ_C 175.3有相关，提示糖与羧基相连。通过与文献中报道的波谱数据对比^[24]，确定化合物4为对映-2-酮基-15,16-二羟基海松烷-8(14)-烯-19-羧酸-β-吡喃葡萄糖苷。

化合物5：白色粉末（甲醇），易溶于甲醇，1%茴香醛-硫酸显红色。ESI-MS m/z: 645.4 [M－H]⁻，故得出相对分子质量为646，分子式C₃₂H₅₄O₁₃。¹H-NMR (400 MHz, Pyridine-d₅)谱的高场区有4个甲基单峰信号：δ_H 0.66(3H, s, Me-20), 0.82 (3H, s, Me-19), 1.06 (3H, s, Me-17) 和1.13 (3H, s, Me-18)；低场区显示1个双键氢信号δ_H 5.30(1H, s) 提示存在三取代的双键，2个端基氢信号δ_H 4.98(1H, d, J = 7.5 Hz) 和δ_H 4.81 (1H, d, J = 7.5 Hz)，以及16个连氧碳上的氢信号，提示该化合物是1个连有2个糖的二萜苷。¹³C-NMR (100 MHz, Pyridine-d₅)给出32个碳原子信号δ_C 36.6(C-1), 23.8 (C-2), 85.1 (C-3), 38.5 (C-4), 54.8 (C-5), 22.4 (C-6), 36.6 (C-7), 139.0(C-8), 50.7 (C-9), 38.5 (C-10), 18.8 (C-11), 32.0 (C-12), 37.9 (C-13), 128.7 (C-14),89.5 (C-15), 63.5 (C-16), 23.4 (C-17), 28.7 (C-18), 17.0 (C-19), 14.6 (C-20)；10个糖上的碳信号δ_C 105.9 (C-1′′), 102.2 (C-1′), 78.4(C-3′′), 78.4 (C-3′), 78.1 (C-5′′), 78.0 (C-5′), 75.4 (C-2′′), 74.9(C-2′), 71.9(C-4′′), 71.7 (C-4′), 63.0 (C-6′′), 62.5 (C-6′)。¹H-NMR和¹³C-NMR谱也都显示了对映海松烷型二萜的特征信号。该化合物与豨莶苷相比，多了1个糖基的信号，在HMBC谱中，2个端基氢分别与δ_C 89.5 (C-15) 和δ_C 85.1(C-3) 有相关，确定2个糖的连接位置。对比文献发现，该化合物的波谱数据与报道基本一致^[26]，故鉴定化合物5为豨莶新苷。

化合物6：白色粉末，易溶于甲醇，1%茴香醛-硫酸显红色。EI-MS m/z: 475.25 [M＋Na]⁺。¹H-NMR (400 MHz, Pyridine-d₅)给出8组峰：δ 6.09 (2H, s, H-9, 9′), 3.90 (4H, dd, J = 6.2, 7.4 Hz, H-12, 12′), 4.27 (2H, t,J = 4.8 Hz, H-3, 3′), 2.43 (4H,dd, J = 6.2, 6.4 Hz, H-11, 11′), 3.54 (4H, m, H-6, 6′), 2.15 (4H, m, H-4, 4′), 1.95 (4H,m, H-5, 5′), 2.43 (6H, s, H-13, 13′)；¹³C-NMR (100 MHz, Pyridine-d₅)给出11个碳信号δ_C169.0 (C-1, 1′), 55.3 (C-3, 3′), 31.9 (C-4, 4′), 26.2 (C-5, 5′), 39.0 (C-6, 6′),167.4 (C-8, 8′), 121.0 (C-9, 9′), 150.5 (C-10, 10′), 44.8 (C-11, 11′), 60.1 (C-12,12′), 18.5 (C-13, 13′)。分析化合物的氢谱、碳谱及质谱数据，该化合物为1个对称的结构，根据该化合物的2DNMR数据得到该化合物的平面结构，显示该化合物为二酮哌嗪类化合物。将该化合物的氢谱碳谱数据与文献报道数据进行比对^[27]，两者基本一致，确定化合物6为eleutherazine B。

参考文献（略） 

来  源：王建斌，吴孟华, 曹  晖. 腺梗豨莶中1个新的单萜苷类化合物 [J]. 中草药, 2019, 50(10):2266-2272.

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最后编辑时间为: 2020-03-23 03:38 Monday